免疫球蛋白的分离提纯原理
2018-06-20 13:58:47 浏览次数：0 网友评论 0 条
北京张博士医考中心张银合博士携全体优秀老师助大家考试顺利通过！
免疫球蛋白的分离提纯原理：
目的
有利标记；减少非特异反应；有利Ig定量。
分离提纯方法（原理）：
一般选用2～3种，或同一方法反复进行2～3次北京张博士医考中心搜集整理。
盐析法：在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，亲水性变为疏水性，分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。不同蛋白质盐析所需中性盐的浓度不同，故可分离不同蛋白质。常用中性盐：硫酸铵分析纯试剂。
离子交换层析法：利用不同的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不同，与某一载体上的具有相反电荷的离子基团进行吸附，然后进行解脱，达到纯化蛋白质目的。常用载体：纤维素DEAE，带正电，吸附带负电的Alb、α、β球蛋白。
凝胶过滤法：凝胶颗粒是网状结构，当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时，分子大的先下来，分子小的嵌入凝胶颗粒的网状结构中后下来，从而将分子大小不同的物质分离开来，即为分子筛的作用。常用凝胶：葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶，分离Ig多用G150.
亲和层析法：利用抗原抗体的结合具有特异性、可逆性，将纯化抗原先交联到载体（琼脂糖珠）上，制成亲和层析柱，当Ab（Ig）通过时，与抗原特异性结合在柱上，Ab中杂质流出。然后通过改变缓冲液 pH、离子强度，使Ab解脱下来。
「国家医考网www.www.wide-count.com整理，如有转载，请注明出处」
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有利标记；减少非特异反应；有利Ig定量。
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盐析法：在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，亲水性变为疏水性，分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。不同蛋白质盐析所需中性盐的浓度不同，故可分离不同蛋白质。常用中性盐：硫酸铵分析纯试剂。
离子交换层析法：利用不同的蛋白质在缓冲溶液中所带电荷不同，与某一载体上的具有相反电荷的离子基团进行吸附，然后进行解脱，达到纯化蛋白质目的。常用载体：纤维素DEAE，带正电，吸附带负电的Alb、α、β球蛋白。
凝胶过滤法：凝胶颗粒是网状结构，当分子大小不同的混合物通过凝胶柱时，分子大的先下来，分子小的嵌入凝胶颗粒的网状结构中后下来，从而将分子大小不同的物质分离开来，即为分子筛的作用。常用凝胶：葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶，分离Ig多用G150.
亲和层析法：利用抗原抗体的结合具有特异性、可逆性，将纯化抗原先交联到载体（琼脂糖珠）上，制成亲和层析柱，当Ab（Ig）通过时，与抗原特异性结合在柱上，Ab中杂质流出。然后通过改变缓冲液 pH、离子强度，使Ab解脱下来。
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